绵羊肺炎支原体核糖体蛋白30S rpsE基因的原核表达及多克隆抗体的制备

摘要

旨在了解绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae)30S rpsE蛋白的生物学特性及其蛋白免疫原性。用在线分析软件预测30S rpsE蛋白的理化性质、B细胞抗原表位、糖基化位点、二级结构及三级结构等；采用PCR方法从病羊鼻拭子样品中扩增得到30S rpsE基因片段，经NdeⅠ、XhoⅠ酶切纯化后，将其连接到pET-42b载体上，构建原核表达载体pET-42b-30S rpsE,使用不同浓度IPTG诱导蛋白在大肠杆菌BL21中表达；重组蛋白通过SDS-PAGE和Western blot进行鉴定，用镍层析法纯化蛋白后，与弗氏佐剂1∶1混合注射免疫家兔，然后采取全血，检测血清抗体效价及特异性。结果：经预测30S rpsE蛋白是亲水无信号肽的膜外蛋白，无跨膜结构域，有一个糖基化位点；成功构建了原核表达载体pET-42b-30S rpsE,表达的重组蛋白分子量约为25.9 ku,以包涵体和可溶性的形式存在；免疫家兔后血清抗体效价为1∶25 600,证实30S rpsE蛋白具有较好的免疫原性。

关键词

肺炎支原体 / 30S rpsE基因 / 原核表达 / 多克隆抗体