skMLCK基因对成肌细胞C2C12肌纤维组成及信号通路的影响

摘要

旨在研究高、低表达骨骼肌肌球蛋白轻链激酶(skMLCK)基因对肌纤维组成成分和信号通路关键分子的影响。采用高表达和RNAi技术，获得skMLCK高、低表达稳转成肌细胞C2C12细胞株，提取细胞总RNA和总蛋白质，采用实时定量PCR和Western blot方法检测skMLCK高、低表达后C2C12中skMLCK基因，5种肌纤维组成成分肌球蛋白轻链(MLC)、肌球蛋白重链(MyHC)slow、MyHC 2a、MyHC 2x和MyHC 2b和6种信号通路关键因子肌球蛋白增强因子2C(MEF2C)、钙调蛋白(CaM)、促分裂原活化蛋白激酶p38(MAPKp38)、AMPK激活性蛋白激酶α2(AMPKα2)、RhoA和丝切蛋白2(CFL2)的表达情况。结果：在高、低表达稳转株中信号通路关键分子MAPKp38与skMLCK蛋白和mRNA表达量变化相同；2种肌纤维组成成分(MyHC 2x和MyHC 2b)和3种信号通路关键分子(CFL2、AMPKα2和RhoA)与skMLCK基因mRNA表达量变化相反；2种肌纤维组成成分(MyHC 2x和MyHC 2b)和4种信号通路关键分子(MEF2C、CaM、AMPKα2和CFL2)与skMLCK蛋白表达量变化相反，其余组分结果均一致；将所有蛋白质表达结果合并进行统计学分析发现，skMLCK基因与信号通路RhoA高度相关。综上，skMLCK基因可能通过改变C2C12细胞中RhoA信号通路来影响肌纤维的组成，skMLCK基因可以抑制CFL2的表达和肌纤维的生长。

关键词

骨骼肌肌球蛋白轻链激酶 / C2C12细胞株 / 肌纤维 / 信号通路