猫杯状病毒VP1蛋白原核表达及间接ELISA检测方法的建立

摘要

旨在建立一种灵敏、准确、高通量检测猫杯状病毒(feline calicivirus, FCV)抗体的间接ELISA方法。本研究通过优化表达条件，在大肠杆菌中表达FCV的VP1蛋白，对重组蛋白进行镍离子亲和层析纯化和透析复性，通过SDS-PAGE和Western blot验证重组蛋白；以重组VP1蛋白为包被抗原建立检测FCV抗体的间接ELISA方法，通过方阵滴定法确定抗原最佳包被浓度和抗体最佳稀释度，优化抗原包被条件、样品孵育时间、封闭液种类等条件，并对其性能进行验证。结果：表达的目的蛋白条带清晰、大小正确，与FCV阳性血清具有良好的反应性，建立的间接ELISA方法检测6份FCV阴性血清，猫细小病毒(feline parvovirus, FPV)阳性血清，猫疱疹病毒(feline herpesvirus, FHV)阳性血清均为阴性，对FCV阳性血清的最低检出效价可达1∶10 240,组间与组内变异系数均小于10%,与商品化试剂盒相比符合率达100%。综上，本研究建立的间接ELISA方法具有良好的灵敏度、重复性和符合率，与其他猫常见病毒阳性血清不发生交叉反应，可以用于临床样品的检测，为FCV感染的诊断、防控、疫苗免疫效力评价提供了技术手段。

关键词

猫杯状病毒VP1蛋白 / 原核表达 / 间接ELISA

基金资助

南京农业大学新进博士科研启动费项目(804006)