犬C群轮状病毒探针法实时荧光RT-LAMP方法的建立与应用

摘要

旨在建立一种检测犬C群轮状病毒(CRV C)的探针法实时荧光反转录环介导等温扩增方法(RT-LAMP)。以病毒基因组的保守序列VP6为靶标，设计合成1组LAMP引物探针，对反应的各项参数进行优化后确定方法的特异性、敏感性等各项指标，进行临床样品检测以评估方法的实际效果。结果：该方法检测下限为7.71×10～0 copies/μL,敏感性与荧光定量RT-PCR相当。重复试验结果的变异系数小于4.35%。与犬A群轮状病毒(CRV A)、犬瘟热病毒(CDV)、犬细小病毒(CPV)、犬肠道冠状病毒(CCoV)和犬星状病毒(CaAstV)均无交叉反应。临床样品检测符合率试验表明，本方法与荧光定量RT-PCR方法的总体符合率达到了98.46%(64/65)。综上，本研究建立的探针法实时荧光RT-LAMP方法具有反应快速、灵敏度高、特异性强、仪器成本低等优点，可用于CRV C快速检测、临床诊断与疫病监测。

关键词

探针法 / 环介导等温扩增 / 犬C群轮状病毒 / 快速检测

基金资助

上海市科技兴农项目(2022-02-08-00-12-F01122)