杜洛克公猪精液NAGase对调控精子功能蛋白质组学的研究

摘要

旨在以杜洛克公猪精液为研究对象，通过N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAGase)抑制剂体外处理精液，经12.5%SDS-PAGE对处理好的精子样品进行双向电泳分离，筛选NAGase作用互作点蛋白表达差异；表达丰度差异的蛋白经酶消化后进行质谱分析。结果：银染筛选获得57个差异表达蛋白点在凝胶中，蛋白点主要分布在pH值3～10和相对分子质量14.4～116 kDa的范围内；经NCBI和Mascot数据库进行差异表达蛋白匹配搜索，成功鉴定与精子功能相关的上调差异表达蛋白8个，分别是磷脂酰乙醇胺结合蛋白4(PEBP4)、精卵融合蛋白4(IZUMO4)、精浆糖蛋白1(PSP-1)、猪精子黏附蛋白(AWN)、糖结合蛋白(SPMI)、细胞色素c氧化酶Ⅵα亚基多肽1(COX6A1)、二氢硫辛酸脱氢酶蛋白(DLD)和伴侣蛋白1(TCP1);8个上调差异表达蛋白主要涉及精子成熟、精子运动、精卵识别等生理功能。通过STRING工具分析蛋白质互作关系表明IZUMO蛋白可能是NAGase调节精子功能的一个重要靶点并形成了可能的蛋白质调控网络。研究结果为提高公猪生产性能研究奠定了基础。

关键词

杜洛克公猪 / N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶 / 精子功能 / 蛋白质组学