猪繁殖与呼吸综合征病毒谱系8毒株特异性单克隆抗体研制

摘要

猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）流行毒株存在多种基因亚型（谱系）和抗原性差异，为了鉴别不同谱系流行毒株，选取PRRSV谱系8毒株BB0907（高致病性毒株）非结构蛋白2（NSP2）高变区基因片段（tNSP2）,采用大肠杆菌表达制备获得NSP2重组蛋白，并免疫BALB/c小鼠。结果：研制出5株NSP2单克隆抗体（3D6、6B2、6C3、8C2和8H6）,小鼠腹水ELISA抗体效价均达1∶216 000;5株单抗轻链类型都为Kappa型，3D6、6B2和6C8的重链类型为IgG1,8C2的重链类型为IgG2b, 8H6重链类型为IgG2a;通过构建tNSP2蛋白截短体，Western blot鉴定出4个抗原表位，即⁴⁸⁵GPLNFPTPSE⁴⁹⁴、⁵⁵⁵FPLAPSQNMG⁵⁶⁴、⁵⁷⁵EVLSEISDIL⁵⁸⁴和⁵⁸⁵NDTPAPVS⁵⁹³;间接免疫荧光试验结果显示，这些单抗均能与PRRSV谱系8毒株发生特异性反应，但与谱系1和谱系5毒株不反应。本研究为PRRSV分离毒株抗原鉴别诊断和生物学研究提供了有意义的研究材料。

关键词

猪繁殖与呼吸综合征病毒 / Nsp2 / 单克隆抗体 / B细胞表位