牛POLB基因核心启动子鉴定及转录调控分析

摘要

旨在筛选牛DNA聚合酶β(DNA polymerase β, POLB)基因核心启动子并对调控该基因表达的转录因子进行预测和鉴定。以牛POLB基因CDS区上游1 751 bp序列为模板，构建5个包含不同截短长度的启动子报告基因载体，利用双荧光素酶报告基因系统鉴定核心启动子，利用AnimalTFDB 3.0预测核心启动子结合转录因子，过表达转录因子后分析其对牛POLB基因的转录调控功能。结果：在牛肌肉原代细胞中，构建的5个截短的启动子报告基因载体均具有转录起始活性，pGL3-151(-151～-1 bp)和pGL3-1351(-1 351～-1 bp)的相对荧光素酶活性显著高于pGL3-551(-551～-1 bp)(P<0.001,P<0.000 1),表明-151～-1 bp和-1 351～-551 bp为牛POLB基因核心启动子区；AnimalTFDB 3.0预测核心启动子区存在转录因子特异性蛋白1(specificity protein 1, SP1)的结合位点；在牛肌肉原代细胞中过表达转录因子SP1,能够显著降低POLB基因的转录活性。本试验结果为进一步研究该基因表达调控机制提供参考。

关键词

牛 / POLB基因 / 核心启动子 / 转录因子 / SP1