猪调节性T细胞分子标记物FoxP3单克隆抗体的制备与鉴定

摘要

调节性T细胞（Treg）是具有免疫调节活性的淋巴细胞，通过抑制各种效应性淋巴细胞来诱导自身免疫耐受。FoxP3是CD4⁺CD25⁺ Treg细胞重要的转录因子，对其分化发育和功能维持有着重要的调控作用，因此联合FoxP3抗原可以更好地识别CD4⁺CD25⁺ Treg细胞。为了制备出特异性的猪Treg细胞表面标记物FoxP3的单克隆抗体，本研究选择抗原性较强的基因编码片段，构建了FoxP3抗原表位区段（1～840 bp）的原核表达质粒，诱导表达并纯化后，用目的蛋白免疫BALB/c小鼠，取免疫小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞进行融合，通过间接ELISA、Western blot和间接免疫荧光的方法筛选能稳定分泌抗体的阳性杂交瘤细胞。结果：筛选到了5株效价较高的FoxP3单克隆抗体产生细胞（F4B9、F4A9、F1E12、F1A11和F4A10）,均具有良好的特异性，能识别内源性和外源性FoxP3蛋白，且能稳定地分泌抗体，为定性或定量检测猪Treg细胞以及验证Treg细胞的功能奠定了基础。

关键词

猪 / Treg细胞 / FoxP3 / 抗体制备 / 单克隆抗

基金资助

福建省自然科学基金项目(2021J01082); 福建农林大学科技创新专项基金项目(KFb22066XA); 福建农林大学2022年校级大学生创新创业训练计划项目(X202210389094)