犬冠状病毒和犬细小病毒双重TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立

摘要

旨在建立犬冠状病毒（CCoV）和犬细小病毒（CPV）双重TaqMan荧光定量PCR检测方法。针对CCoV的3′UTR与CPV的VP2设计引物与探针，通过对反应体系与条件进行优化，建立了CCoV与CPV的双重荧光定量PCR检测方法，并对该方法进行敏感性、特异性、重复性验证与临床样品检验。结果：CCoV与CPV阳性参考质粒浓度在10～2～10～7 copies/μL,CCoV与CPV的标准曲线R²分别为0.999与0.996,线性关系良好，CCoV与CPV的最低检测限均为5 copies/μL,与其他病原无交叉反应，组内与组间的变异系数均小于1.38%,说明该方法灵敏度高、特异性强、重复性良好；对113份临床样本进行检测，与普通PCR比较，该方法对CCoV和CPV的检出率较高，分别为37.2%和40.7%。研究表明，本试验建立的CCoV和CPV双重荧光定量PCR方法检测效果良好，为相关疾病的临床诊断、流行病调查等提供了有力工具。

关键词

犬冠状病毒 / 犬细小病毒 / 双重实时荧光定量PCR / TaqMan探针