猪卵巢颗粒细胞中circINHBA的鉴定及与细胞凋亡的相关性分析

摘要

实验室前期通过RNA测序发现1个新的环状RNA分子circINHBA,并确定其在猪健康和早期闭锁卵泡中呈现显著差异表达。本研究旨在鉴定并分析circINHBA的表达模式，探索其在猪卵泡颗粒细胞(GCs)凋亡中的作用，为揭示调控猪卵泡闭锁的机制、筛选调控猪卵泡闭锁和GCs凋亡的靶标调节物提供依据。根据circINHBA,设计跨反向剪切位点的发散引物，通过PCR、琼脂糖凝胶电泳、Sanger测序鉴定circINHBA的环状结构，并通过使用或不使用Rnase R消化的实时荧光定量PCR(RT-qPCR)进行稳定性检验；利用核质分离技术和荧光原位杂交技术(FISH)分析猪卵泡GCs中circINHBA的亚细胞定位；RT-qPCR检测circINHBA在猪健康和早期闭锁卵泡中的表达情况，通过circINHBA干扰试验分析其对凋亡标志基因BCL2和BAX表达的影响；利用流式细胞术分析circINHBA对猪卵泡GCs凋亡的影响。结果：成功验证circINHBA为一种新的环状RNA分子，具有稳定的环状结构；定量分析发现，circINHBA在健康卵泡中的表达量显著高于早期闭锁卵泡，且亚细胞定位结果表明其主要分布于细胞质；特异性si-RNA干扰试验及凋亡标志基因检测发现circINHBA具有抑制猪卵泡GCs凋亡的作用。综上，本研究证实了1个全新circINHBA分子对猪卵泡GCs凋亡的影响，揭示了其在猪卵泡闭锁过程中的潜在作用，为进一步探究环状RNA分子在猪卵泡闭锁过程中的调控作用及分子机制奠定了基础。

关键词

环状RNA / circINHBA / 猪 / 卵泡闭锁 / 颗粒细胞凋亡