熊果酸通过JAK1/STAT3缓解脂多糖诱导的BALB/c小鼠炎症反应

刘恋; 刘佳丽; 黄永熙; 余捷; 汤锋; 白若男; 刘满; 朱君; 郭利伟; 刘国平; 杨小林

畜牧与兽医 ›› 2024, Vol. 56 ›› Issue (10) : 39 -48.

刘恋, 刘佳丽, 黄永熙, 余捷, 汤锋, 白若男, 刘满, 朱君, 郭利伟, 刘国平, 杨小林

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摘要

旨在通过脂多糖（LPS）建立RAW264.7细胞与BALB/c小鼠炎症模型进行体内外试验，探讨熊果酸对LPS诱导炎症的保护作用。体外采用MTT法测定熊果酸和LPS对RAW264.7细胞活力的影响，中性红测试熊果酸对LPS刺激RAW264.7细胞吞噬能力的影响，Griess法测定NO释放水平；荧光定量PCR（RT-qPCR）测定JAK激酶1（JAK1）/信号转导子和转录激活子3（STAT3）信号通路和炎症因子mRNA表达水平。BALB/c小鼠灌胃熊果酸分为25 mg/kg的低剂量组（UA-L）、50 mg/kg的中剂量组（UA-M）和100 mg/kg的高剂量组（UA-H）,每只小鼠200μL/d,灌胃7 d,腹腔注射LPS诱导炎症反应后采集脾脏，计算脾脏指数，使用流式细胞术测定脾脏T细胞分化和Th17/Treg平衡，RT-qPCR方法验证α肿瘤坏死因子（TNF-α）、白细胞介素（IL）-1、JAK1和STAT3的mRNA表达水平。结果：熊果酸在12.5μg/mL范围内对细胞活力无影响（P>0.05）,LPS浓度为1μg/mL时，细胞存活率为54.55%;LPS刺激后RAW264.7细胞吞噬能力显著下降（P<0.05）,NO释放水平显著上升（P<0.05）;熊果酸干预后，细胞吞噬能力呈剂量依赖式上升，NO释放水平下降。RT-qPCR结果表明，RAW264.7细胞经LPS刺激后，一氧化氮合酶（iNOS）、IL-1、IL-6、 TNF-α、JAK1和STAT3的mRNA表达水平均显著上升（P<0.05）;熊果酸干预后，上述因子mRNA表达水平均显著下降（P<0.05）。体内试验结果表明，腹腔注射LPS后，小鼠脾脏指数显著高于空白对照组（P<0.05）,CD4⁺/CD8⁺和Th17/Treg细胞出现失衡；不同剂量熊果酸干预后脾脏指数均显著降低（P<0.05）,对小鼠CD4⁺和CD8⁺细胞分化具有明显促进作用，同时改善Th17/Treg失衡；腹腔注射LPS的小鼠脾脏IL-1、 TNF-α、JAK1和STAT3的mRNA表达水平均显著上升（P<0.05）,提前饲喂熊果酸能改善这一情况。综上，熊果酸通过调节炎症因子、改善T细胞分化失衡，从而降低由LPS诱导的RAW264.7细胞和小鼠的炎症反应。