新西兰兔下丘脑qPCR内参基因的筛选和验证

摘要

为筛选适合新西兰白兔下丘脑的最佳内参基因，试验选定甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)、肌动蛋白β(ACTB)、β-2-微球蛋白(B2M)、酪氨酸3-单加氧酶(YWHAZ)、次黄嘌呤磷酸核糖转移酶1(HPRT1)、核糖体蛋白L4(RPL4)和TATA-box结合蛋白(TBP)共7个候选内参基因，利用实时荧光定量PCR(qPCR)技术对不同年龄、性别及发情状态的新西兰白兔下丘脑组织的基因表达水平进行检测；通过RefFinder在线软件综合ΔCt、GeNorm、NormFinder和BestKeper等4种算法的分析结果来评估内参基因表达的稳定性，并选取在下丘脑表达的功能基因雌激素受体(ER1)、孕激素受体(PGR)和RFamide神经肽VF(NPVF)对候选内参基因稳定性和评价结果的可靠性进行验证。结果：不同年龄的雌性新西兰白兔下丘脑稳定表达的内参基因是YWHAZ和GAPDH;雄性新西兰白兔下丘脑稳定性表达的内参基因YWHAZ和TBP,而不同发情期新西兰白兔适合使用HPRT1和YWHAZ作为内参基因。当使用不同内参基因进行标准化时，目的基因表达水平受到样本不同生理状态而出现明显变化，强调了先行验证内参基因对于qPCR研究基因表达水平的重要性。

关键词

新西兰白兔 / 下丘脑 / 内参基因 / 稳定性评价和验证

基金资助

福建省中青年教师教育科研项目(JAT220070); 福建省科技计划项目[高校产学合作项目(2023N5004),星火项目(2023S0007,2023S0015,2023S0054),对外合作项目(2023I1009)]; 福建农林大学农村振兴服务团队-草食性动物产业服务团队项目(11899170139)