猪丹毒杆菌SpaA单克隆抗体的制备及抗原表位鉴定

摘要

旨在制备猪丹毒杆菌单克隆抗体，并确定其识别的抗原表位。采用原核表达、细胞融合试验、间接ELISA、亚克隆技术、Western blot、抗原表位以及抗体分型鉴定来研究猪丹毒杆菌表面保护性抗原A(SpaA)的单克隆抗体。结果：制备了SpaA重组蛋白，得到4株稳定分泌的单抗，且这4株单抗均能与SpaA蛋白发生特异性反应，其中1E8、5B3杂交瘤细胞培养上清液抗体效价为1∶1 600,5B5、9B5杂交瘤细胞培养上清液抗体效价为1∶3 200;1E8重链为IgG 2b, 5B3、9B5重链为IgG 1,5B5重链为IgG 2a,轻链均为Kappa; 1E8、5B5识别的抗原表位因SpaA蛋白C端的重复序列无法确认，5B3识别的抗原表位为258～267 aa, 9B5识别的抗原表位为462～472 aa。综上，本研究制备的单克隆抗体将为猪丹毒杆菌ELISA检测方法的建立奠定基础。

关键词

猪丹毒杆菌 / SpaA蛋白 / 原核表达 / 单克隆抗体