猪细小病毒4型单克隆抗体制备及抗原表位鉴定

摘要

为了制备猪细小病毒（PPV）4型Cap蛋白单克隆抗体（mAb）并鉴定其抗原表位，试验采用原核表达的Cap重组蛋白免疫BALB/c小鼠，将其脾细胞与SP2/0细胞进行融合，通过酶联免疫吸附测定（ELISA）、血凝抑制（HI）和免疫过氧化物酶单层细胞试验（IPMA）筛选阳性克隆，最终获得2E7、4D6和5C9这3株特异性杂交瘤细胞株；然后用mAb对Cap蛋白多肽进行ELISA检测，鉴定分析其抗原表位。结果显示：4D6和5C9 mAb识别表位为线性表位，分别为 ³⁸⁷RRQDN³⁹¹和⁵⁷⁸QRKE⁵⁸¹,而2E7 mAb识别的表位为构象表位；通过对Cap蛋白3D结构定位分析，³⁸⁷RRQDN³⁹¹和⁵⁷⁸QRKE⁵⁸¹抗原表位位于蛋白表面，且在PPV4亚型中高度保守，而与猪瘟病毒（CSFV）、猪伪狂犬病病毒（PRV）、猪圆环病毒2型（PCV-2）、猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）、猪乙型脑炎病毒（JEV）和猪博卡病毒（PBoV）基因序列同源性低。本研究为PPV4诊断试剂的开发和新型疫苗的研制提供了参考。

关键词

猪细小病毒4型 / 单克隆抗体 / 抗原表位