禽流感病毒M基因的重组慢病毒构建

摘要

旨在建立针对禽流感病毒(AIV)的实验室快速分子检测方法。构建重组慢病毒作为分子检测方法中的阳性对照品，采用PCR扩增技术获得AIV M基因的保守区片段，并构建pLVX-M-IRES-ZsGreen1重组慢病毒穿梭载体；将鉴定成功的重组穿梭质粒与骨架质粒pMD2.G和psPAX2共转染293T细胞，获得携带AIV M基因保守区的重组慢病毒；将重组慢病毒感染293T细胞，观察其荧光表达情况，收集、浓缩病毒液并测定其滴度；用AIV实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测方法检测M基因。结果表明：携带AIV M基因的重组慢病毒成功拯救，且其病毒滴度高、安全性强，可作为分子检测方法的阳性对照标准品。综上，本研究成功构建了AIV M基因的重组慢病毒，可高效包装出含有M基因保守区的慢病毒颗粒，为后续AIV分子检测试剂盒的研制提供参考。

关键词

禽流感病毒 / M基因 / 293T细胞 / 重组慢病毒