枯草芽胞杆菌肽聚糖介导绵羊瘤胃上皮细胞β-防御素表达的通路研究

摘要

旨在探究来源于枯草芽胞杆菌细胞壁的肽聚糖诱导绵羊瘤胃上皮细胞(ORECs)β-防御素-1(SBD-1)表达的信号通路情况。使用20μg/mL肽聚糖刺激ORECs 2 h,通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和蛋白免疫印迹(Western blot)方法，检测SBD-1表达的信号通路因子mRNA和蛋白的表达量；使用特异性抑制剂抑制各信号通路因子，再使用20μg/mL肽聚糖刺激ORECs 2 h,通过RT-qPCR和ELISA方法检测SBD-1 mRNA和蛋白的表达量，确定介导SBD-1表达的主要信号通路。结果：20μg/mL肽聚糖显著提升了Toll样受体2(TLR-2)、髓样分化因子88(MyD88)、细胞外调节蛋白激酶(ERK1/2)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)和核因子κB(NF-κB)mRNA和蛋白的表达量(P<0.001,P<0.05),对p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK,P38)的mRNA表达量没有显著影响；使用信号通路抑制剂抑制了ERK1/2、JNK和NF-κB信号通路，极显著降低肽聚糖诱导ORECs中SBD-1的mRNA和蛋白表达量(P<0.001,P<0.01)。结论：枯草芽胞杆菌肽聚糖诱导SBD-1表达由TLR-2-MyD88-NF-κB和TLR-2-MyD88-MAPK(JNK、ERK1/2)共同介导。

关键词

枯草芽胞杆菌肽聚糖 / β-防御素-1 / 绵羊瘤胃上皮细胞 / 核因子κB