鸡SOX6基因真核表达载体构建及其对成肌细胞分化相关基因表达的影响

刘书鸣, 魏志恒, 彭鑫, 周博, 夏磊, 裴军, 徐璐, 郁建峰, 顾志良

畜牧与兽医 ›› 2025, Vol. 57 ›› Issue (05) : 15 -23.

刘书鸣, 魏志恒, 彭鑫, 周博, 夏磊, 裴军, 徐璐, 郁建峰, 顾志良

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摘要

为研究鸡性别决定区域Y盒蛋白转录因子6(SOX6)基因时序表达和在成肌细胞分化中的作用，采用荧光定量PCR方法检测鸡不同组织以及胚胎期(E11～E19)和出壳早期(D0、D3、D6)骨骼肌中SOX6 mRNA的表达；通过RT-PCR扩增并克隆鸡SOX6基因的编码序列区(CDS),经测序分析并利用生物信息学工具预测鸡SOX6蛋白的理化性质和结构功能；构建鸡SOX6基因的真核表达载体并转染至鸡原代成肌细胞，Western blot技术检测重组蛋白的表达；利用荧光定量PCR检测过表达和敲低SOX6基因对成肌分化相关基因表达的影响。结果显示：SOX6 mRNA在鸡12种不同组织中均有表达，其中在胸肌、腿肌较高，而在肌胃和脾脏较低；SOX6 mRNA在胚胎期E11～E19表达量逐渐增加，D6期显著高于其他时期(P<0.05);获得鸡SOX6基因编码区全长2 367 bp,共编码789个氨基酸；生物信息学分析鸡SOX6蛋白为中性、亲水性蛋白，分子量为87.533 kDa,等电点为6.99,不稳定系数为60.95,脂肪系数为62.51;构建SOX6过表达载体并转染至鸡原代成肌细胞中，成功表达出SOX6-MYC融合蛋白；在成肌细胞中过表达SOX6后，肌肉分化标志基因生肌分化因子(MyoD)和肌细胞生成素(MyoG) mRNA表达显著上升(P<0.05),而敲降SOX6后MyoD和MyoG mRNA表达显著下降(P<0.05)。结果表明：SOX6基因对成肌细胞分化发育具有调控作用，为进一步分析SOX6基因功能奠定基础。