海门山羊MSTN基因克隆、生物信息学分析及单碱基编辑的研究

摘要

为探明海门山羊不同组织中肌肉生长抑制素(MSTN)基因表达规律及其编码蛋白结构特点，通过克隆海门山羊MSTN基因CDS序列并分析其生物特点，运用实时荧光定量PCR技术分析MSTN基因在不同组织中的表达水平，在MSTN基因第2、3外显子上设计3个单碱基编辑靶位点，将构建的sgRNA质粒分别与胞嘧啶碱基编辑器YE1-BE3-FNLS电转入培养的海门山羊胎儿成纤维细胞中，筛选48 h后提取细胞基因组DNA,对PCR扩增靶位点序列进行Sanger测序和TA克隆分析。结果：海门山羊MSTN基因的CDS序列编码375个氨基酸，具有高度保守性。海门山羊不同组织中MSTN基因表达水平存在差异，其中骨骼肌的表达量最高；3条sgRNA均可在MSTN基因外显子上进行单碱基编辑，编辑效率分别为25%、37%和29%。结论：研究结果为进一步利用单碱基基因编辑技术培育MSTN基因突变海门山羊新品系提供了新的依据。

关键词

海门山羊 / 肌肉生长抑制素 / 单碱基编辑