基于CRISPR/Cas12a系统联合重组酶聚合酶扩增的鸭星状病毒2型核酸检测试纸条的制备

摘要

为建立鸭星状病毒2型(DAstV-2)核酸现场快速检测方法，基于CRISPR/Casl2a切割原理，联合重组酶聚合酶等温扩增(recombinase ploymerase amplification, RPA),设计用于DAstV-2核酸RPA扩增的引物和基于CRISPR/Cas12a反应的向导RNA(crRNA),优化反应条件确立最佳检测体系，并用胶体金横向流动试纸条(lateral flow dipstick, LFD)报告检测结果。结果：该检测体系对DAstV-2重组质粒的检出下限为10 copies/μL,灵敏性强且重复性好；用此检测体系检测鸭常见病毒，除DAstV-2核酸阳性外，其他均为阴性，特异性强；与普通RT-PCR的检测结果相比较，符合率达到100%,且更加方便快捷。研究结果提示，基于RPA-CRISPR/Cas12a-LFD系统的DAstV-2核酸检测方法灵敏性好、特异性强、操作简单，可在37℃恒温下实现DAstV-2的现场快速可视化检测。

关键词

鸭星状病毒2型 / 重组酶聚合酶扩增 / CRISPR/Cas12a / 横向流动试纸条

基金资助

2023年度河南省重点研发与推广专项(科技攻关)(232102111043); 信阳农林学院家禽重大疫病防控科技创新团队项目(2022CXTD06)