猪TRIM56 E3泛素连接酶活性突变体的构建及功能研究

摘要

旨在构建猪三基序蛋白(TRIM)56 E3泛素连接酶活性突变体并验证其在干扰素刺激蛋白(STING)介导的Ⅰ型干扰素信号通路中的作用。对猪源、人源TRIM56进行同源性比对、氨基酸序列分析，确定猪TRIM56 E3泛素连接酶活性位点；设计猪TRIM56 E3泛素连接酶活性突变体引物，定点突变猪TRIM56 E3泛素连接酶活性位点，构建猪TRIM56 E3泛素连接酶活性突变体质粒并通过蛋白质免疫印迹(Western blot)验证表达；通过双荧光素酶报告基因(Luciferase)试验、实时荧光定量PCR(Real-time PCR)试验及免疫共沉淀(Co-IP)试验研究猪TRIM56及其E3泛素连接酶活性突变体在STING介导的Ⅰ型干扰素信号通路中的作用。结果：猪TRIM56 E3泛素连接酶活性突变体构建成功；猪TRIM56促进STING介导的干扰素β(IFN-β)mRNA水平和启动子活性，促进STING K63连接的多聚泛素化修饰，而猪TRIM56 E3泛素连接酶活性突变体没有显著促进作用。本研究为后续开展猪TRIM56在抗病毒天然免疫中的作用提供了有效工具。

关键词

猪TRIM56 / E3泛素连接酶 / 定点突变 / STING