猪A群轮状病毒VP4单克隆抗体的制备和初步鉴定

毛玎懿; 孙波涛; 戴琦; 李文良; 李梅珍; 陈艳; 赵冰倩; 陈婧; 周斌

畜牧与兽医 ›› 2025, Vol. 57 ›› Issue (06) : 77 -82.

毛玎懿, 孙波涛, 戴琦, 李文良, 李梅珍, 陈艳, 赵冰倩, 陈婧, 周斌

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摘要

旨在制备一种特异性强、灵敏度高的猪A群轮状病毒(porcine rotavirus A,PoRVA)VP4单克隆抗体。本研究通过PCR扩增PoRVA分离株VP4基因的完整片段(2 463 bp),构建原核表达载体pET-28a-VP4表达蛋白后制备单克隆抗体并进行鉴定。结果：重组蛋白大小在98 kDa左右，为不可溶蛋白，存在于包涵体中；经验证，猪轮状病毒阳性血清能够识别该重组蛋白，蛋白条带单一且清晰，具备良好的抗原性；蛋白纯化后，经小鼠免疫流程以及细胞融合筛选，3轮亚克隆后最终获得1株能稳定分泌抗VP4蛋白的阳性杂交瘤细胞株4B10,其轻链类型为Kappa型，重链亚型为IgG1,制备的小鼠腹水效价可达1∶3 000 000;在此基础上制备的单克隆抗体能特异性识别PoRV Pig/NJ/2012,具有良好反应性，可用于靶抗原的直接检测。综上，本研究制备的单克隆抗体特异性强、灵敏度高，为后续蛋白功能及病毒致病机制的研究提供了生物材料。