火鸡疱疹病毒亚克隆对活载体疫苗性能影响的研究

摘要

旨在比较火鸡疱疹病毒(HVT)亚克隆对构建活载体疫苗的影响。本研究采用同源重组方法，在HVT Fc126的UL55与UL56基因间的非编码区插入MiniF序列，构建重组病毒；采用细菌人工染色体(BAC)技术，分别提取病毒DNA后转入DH10B感受态细胞中，构建3个对应的BAC;将传染性法氏囊病毒(IBDV)的VP2表达盒分别与3株BAC的DNA共转染鸡胚成纤维细胞(CEF),进行重组病毒的拯救；将重组活载体、亲本毒株及商品化重组活载体的生长动力学进行比较；将3株重组活载体接种SPF鸡后，在免疫后第3、4、5、6周等共4个时间点采集血清进行琼脂扩散试验。结果：获得3个纯化的HVT-MiniF亚克隆病毒，然后获得3株对应的HVT BAC,分别命名为HVT BAC-C1、HVT BAC-C2和HVT BAC-C3。限制性片段长度多态性(RFLP)鉴定发现这3个BAC亚克隆的基因组主体序列几乎一致，略有差异；进一步获得3株相对应的VP2重组HVT活载体，分别命名为HVT-VP2-C1、HVT-VP2-C2、HVT-VP2-C3;生长动力学结果表明，3株VP2重组病毒与2株对照病毒的滴度在6、24、36和72 h存在显著性差异(P<0.05),在12和48 h无明显差异(P>0.05);琼脂扩散试验结果发现3个亚克隆的重组病毒均能产生较高抗体，但都没有达到对照商品疫苗的水平；3个亚克隆重组病毒之间产生的抗体存在明显差异，其中HVT-VP2-C2免疫鸡后产生的抗体最高。综上，HVT在传代过程中可能易出现基因变异，提示在构建重组活载体疫苗时，应充分考虑不同亚克隆活载体的免疫效力差异，做好种毒纯化。

关键词

火鸡疱疹病毒 / 亚克隆 / 活载体疫苗 / 细菌人工染色体 / 免疫效力