猪肺炎支原体实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用

摘要

为建立一种高效准确检测猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae,Mhp)的实时荧光定量PCR(RT-qPCR)方法，以Mhp P46基因为靶基因设计、合成特异性引物及探针，通过优化反应条件，建立了Mhp RT-q PCR检测方法，并应用于临床样品检测。结果:该方法的最佳引物和探针浓度分别为0.4μmol/L和0.2μmol/L，最适退火温度为60℃，Ct值与标准质粒拷贝数之间具有良好的线性关系，与其他猪常见病原体无交叉反应，检测最低拷贝数为1.0×10～1copies/μL，组内和组间变异系数均小于2%，建立的RT-q PCR方法特异性、敏感性与重复性均较好;利用建立的方法与商品化试剂盒对81份临床样品进行检测，显示敏感性优于商品化试剂盒;同时对湖南省某规模化猪场生长育肥猪进行跟踪监测，共采集350份口、鼻拭子样品，发现100～130日龄属于Mhp感染活跃阶段，且临床用药可减轻感染程度。综上，本试验建立的RT-q PCR方法可用于Mhp监测和流行情况调查，为Mhp感染的防控与净化提供技术支持。

关键词

猪肺炎支原体 / 实时荧光定量PCR / 检测方法