猪乳腺上皮细胞的分离与鉴定

摘要

旨在建立猪乳腺上皮细胞(PMEC)的原代培养方法，为猪乳腺发育、分化及泌乳机制研究和病原体感染提供生物材料和细胞模型。以9月龄未孕健康母猪的乳腺组织为研究对象，利用胶原酶Ⅰ型和透明质酸酶联合消化法分离PMEC,通过形态学观察、生长曲线测定、间接免疫荧光试验(IFA)、聚合酶链式反应(PCR)、免疫印迹试验(Western blot)对其进行鉴定。结果：经酶消化组织块法获得的PMEC呈现鹅卵石状、上皮样形态并形成单层聚集形岛屿，冻存复苏后细胞生长状态良好，且纯化后的PMEC具备正常的“S”型生长周期；经浓度为0.2 mg/L与2 mg/L的催乳素刺激PMEC后，采用PCR、Western blot方法检测发现细胞中β-酪蛋白(CNS2)的表达水平显著升高(P<0.05),且升高趋势与催乳素的浓度呈正相关；IFA结果显示分离的PMEC表达特异性标记物细胞角蛋白18(CK-18),且表达紧密连接蛋白(ZO-1),表明该细胞形成良好的紧密连接。本研究成功建立了PMEC的分离、培养及鉴定体系，为进一步研究乳腺生物学及相关机制奠定了基础。

关键词

猪乳腺上皮细胞 / 分离 / 鉴定 / 角蛋白18 / β-酪蛋白