猪源NUB1的基因克隆、表达与细胞定位研究

卢洪婷; 朱雪蛟; 周金柱; 张雪寒; 陶然; 郭容利; 牛家强; 李彬

畜牧与兽医 ›› 2025, Vol. 57 ›› Issue (08) : 43 -48.

卢洪婷, 朱雪蛟, 周金柱, 张雪寒, 陶然, 郭容利, 牛家强, 李彬

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摘要

旨在对猪源泛素样蛋白负调控因子1（NUB1）进行鉴定、表达和细胞定位分析，并探究NUB1对猪轮状病毒（PoRV）的复制、先天性免疫、神经前体细胞表达发育调控下调蛋白8（NEDD8）通路调节的影响。设计带有KpnⅠ和XhoⅠ酶切位点的引物并在C端带入His标签，以猪小肠上皮细胞（IPEC-J2）的cDNA为模板，扩增NUB1基因，并克隆到pcDNA3.1（+）载体；利用Lipofectamine^TM3000脂质体转染重组质粒到MARC145细胞，Western blot和间接免疫荧光试验检测NUB1在MARC145细胞中的表达情况，共聚焦显微分析技术确定NUB1定位情况。结果：成功扩增出猪源NUB1基因，并构建NUB1真核表达质粒pcDNA3.1（+）-NUB1-His;重组质粒能在MARC145细胞中表达，NUB1蛋白定位于细胞核和细胞浆。综上，本试验成功构建了可外源表达NUB1的真核表达质粒pcDNA3.1（+）-NUB1-His,为后续研究NUB1的生物学功能及其对PoRV复制的影响奠定了基础。