猪源NUB1的基因克隆、表达与细胞定位研究

摘要

旨在对猪源泛素样蛋白负调控因子1（NUB1）进行鉴定、表达和细胞定位分析，并探究NUB1对猪轮状病毒（PoRV）的复制、先天性免疫、神经前体细胞表达发育调控下调蛋白8（NEDD8）通路调节的影响。设计带有KpnⅠ和XhoⅠ酶切位点的引物并在C端带入His标签，以猪小肠上皮细胞（IPEC-J2）的cDNA为模板，扩增NUB1基因，并克隆到pcDNA3.1（+）载体；利用Lipofectamine^TM3000脂质体转染重组质粒到MARC145细胞，Western blot和间接免疫荧光试验检测NUB1在MARC145细胞中的表达情况，共聚焦显微分析技术确定NUB1定位情况。结果：成功扩增出猪源NUB1基因，并构建NUB1真核表达质粒pcDNA3.1（+）-NUB1-His;重组质粒能在MARC145细胞中表达，NUB1蛋白定位于细胞核和细胞浆。综上，本试验成功构建了可外源表达NUB1的真核表达质粒pcDNA3.1（+）-NUB1-His,为后续研究NUB1的生物学功能及其对PoRV复制的影响奠定了基础。

关键词

NUB1 / NEDD8 / 基因克隆 / 细胞定位 / 基因表达

基金资助

国家重点研发计划项目(2023YFD1801303); 国家自然科学基金项目(32302892); 江苏省自然科学基金项目(BK20221432)