猪繁殖与呼吸综合征病毒非结构蛋白NSP9的表达纯化及多克隆抗体的制备

刘凯; 冯康; 熊江广; 王文清; 张志榜; 李鹏成; 张锦华; 张晓燕

畜牧与兽医 ›› 2025, Vol. 57 ›› Issue (08) : 108 -114.

刘凯, 冯康, 熊江广, 王文清, 张志榜, 李鹏成, 张锦华, 张晓燕

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摘要

旨在获得猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的非结构蛋白NSP9及制备PRRSV NSP9的多克隆抗体。本研究应用PCR技术扩增出全长NSP9目的基因，将其克隆至原核表达载体pET-28a中，同时插入His和Flag融合标签，获得重组质粒pET-28a-NSP9;然后将重组质粒转化至BL21感受态细胞，经IPTG诱导并优化诱导温度和时间，SDS-PAGE和Western blot鉴定，观察NSP9蛋白的表达情况，确定NSP9蛋白的最佳表达条件，应用镍柱亲和层析纯化NSP9蛋白；最后将纯化后的NSP9蛋白免疫BALB/c小鼠，获得多克隆抗体，用ELISA测定抗体效价，Western blot鉴定抗体反应原性。结果：含有pET-28a-NSP9重组质粒的大肠杆菌，在IPTG终浓度为0.2 mmol/L诱导，16℃培养32 h的条件下，NSP9蛋白主要以可溶性形式表达，经镍柱亲和层析纯化成功获得高纯度的NSP9蛋白，经间接ELISA和Western blot测定成功获得特异性的NSP9多克隆抗体。综上，本研究以全长NSP9基因为模板，克隆转化后表达出72 kDa左右的可溶性重组蛋白，利用其作为抗原免疫制备的抗PRRSV多克隆抗体具备良好的生物活性，为后续PRRSV检测、免疫血清诊断试剂的研发及研究PRRSV NSP9的生物学功能奠定了重要基础。