猪A群轮状病毒VP7蛋白的原核表达及间接ELISA检测方法的建立

摘要

旨在建立猪A群轮状病毒（rotavirus A,RVA）抗体的间接ELISA检测方法，以提供一种快速、灵敏且高效的猪RVA抗体检测手段。本研究以原核表达的猪RVA VP7蛋白作为包被抗原，通过对反应条件的系统优化，成功建立针对猪RVA抗体的间接ELISA检测方法。结果：VP7蛋白以包涵体的形式表达，主要形成2种大小的蛋白条带，分别为37 kDa和35.3 kDa。通过优化，确定间接ELISA反应条件为：蛋白包被量为0.25μg/孔，4℃过夜；封闭液为5%脱脂乳，37℃2 h;一抗（待检血清样本）为1∶100稀释，37℃1 h;二抗（HRP标记羊抗猪IgG）为1∶10 000稀释，37℃1 h;显色为15 min。通过检测40份猪阴性血清样本，确定本研究建立的间接ELISA检测方法阳性临界值OD_{450 nm}值为0.274 7,批内和批间重复变异系数均在10%的范围内，具有较高的特异性和灵敏性。对20份临床血清样本的间接ELISA结果与中和试验结果进行比对，二者的符合率为95%。通过检测其他基因型毒株灭活疫苗免疫后的血清表明，VP7蛋白基因型的差异对ELISA阴阳性判定结果没有显著影响。综上，本研究建立的间接ELISA方法可用于监测猪群轮状病毒感染情况及其疫苗的免疫反应。

关键词

猪A群轮状病毒 / VP7蛋白 / 原核表达 / 间接ELISA