微量电穿孔联合CRISPR/Cas9系统制备基因编辑猪胚胎

摘要

电穿孔是一种高通量制备基因编辑胚胎的方法，其操作简单但胚胎基因编辑效率较低。本研究通过改造制作了一个微量电穿孔槽用于胚胎电穿孔，联合CRISPR/Cas9系统，选取肌肉生长抑制素(MSTN)基因作为靶基因，旨在探讨不同电穿孔参数下猪胚胎发育能力和基因编辑效率。结果：改制后的微量电穿孔槽对胚胎发育无显著性影响，但明显降低了电转的液体使用量；比较不同电穿孔参数下的胚胎发育效率发现，30 V-1 ms-4次脉冲、25 V-2 ms-4次脉冲和25 V-3 ms-3次脉冲对胚胎发育影响较低，作为后续试验参数；比较不同参数下电穿孔的编辑效率发现，添加Cas9 mRNA不能获得基因编辑胚胎，25 V-2 ms-4次脉冲时添加100 ng/μL Cas9蛋白其基因编辑效率是(59.29±7.67)%,是获得基因编辑猪胚胎的最佳方案。本研究为电穿孔法制备基因编辑猪奠定了基础。

关键词

CRISPR/Cas9系统 / 电穿孔 / 猪胚胎 / MSTN基因