牛结节性皮肤病病毒ORF005基因缺失重组病毒的构建及生物学特性分析

摘要

旨在通过构建牛结节性皮肤病病毒(lumpy skin disease virus, LSDV)ORF005基因缺失重组病毒，分析其复制能力和对宿主先天性免疫的影响，为LSDV ORF005基因功能的研究奠定基础。本研究利用增强绿色荧光蛋白(EGFP)表达盒替代选取的ORF005基因，扩增其上下游病毒同源臂序列，通过同源重组连接至线性化pUC57载体中，构建基因缺失转移载体pLSDV-ΔORF005-EGFP质粒，将转移载体质粒转染至非洲绿猴肾细胞(Vero)细胞，随后感染LSDV,使LSDV病毒基因组与转移载体质粒发生同源重组，利用多次药物压力筛选、挑取单克隆绿色荧光病变进行筛选和纯化以获得缺失ORF005基因的LSDV重组病毒株，并分析其生物学特性和感染后对宿主先天性免疫的影响。结果：成功构建出缺失ORF005基因的重组病毒LSDVΔORF005-EGFP,该重组病毒在8代细胞传代中能稳定表达EGFP。病毒生长曲线表明，ORF005基因的缺失削弱了LSDV在牛肾细胞(MDBK)细胞中的复制能力(P<0.05)。对比LSDV野毒株，感染该ORF005基因缺失重组病毒增强了MDBK细胞中白细胞介素1b(IL-1b)、肿瘤坏死因子(TNF)、干扰素刺激基因15(ISG15)和抗黏液病毒1蛋白(Mx1)基因的转录水平(P<0.05)。综上，本研究成功构建了ORF005基因缺失的LSDV重组病毒株，为解析LSDV ORF005基因的功能和LSDV基因缺失候选疫苗的奠定基础。

关键词

牛结节性皮肤病病毒 / ORF005基因 / 重组病毒 / 先天免疫