猪传染性胃肠炎病毒N蛋白单克隆抗体的制备及其识别表位鉴定

摘要

为解析猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）N蛋白的抗原表位并探究其亚细胞定位特性，制备N蛋白单克隆抗体（McAb）。通过原核表达系统制备TGEV N蛋白并纯化，以其免疫BALB/c小鼠，经细胞融合与亚克隆筛选获得稳定分泌抗N蛋白McAb的杂交瘤细胞株，采用Western blot和间接免疫荧光（IFA）鉴定McAb的特异性，构建N基因截短突变体质粒，通过IFA鉴定抗原表位，同时利用McAb动态观察N蛋白的亚细胞定位。结果：成功获得高特异性McAb 2F10(腹水效价2¹³),该抗体能特异识别TGEV N蛋白；截短突变体分析鉴定出N蛋白255～265 aa区域为新的线性B细胞表位，结构分析显示该表位位于N蛋白表面；亚细胞定位研究显示，TGEV感染PK-15细胞后，N蛋白在感染早期（2～6 h）主要定位于细胞核内呈点状分布，8 h后部分转移至细胞质，10 h时主要分布于细胞质，呈核质穿梭特性。综上，本研究成功制备了抗TGEV N蛋白单抗2F10,鉴定了位于255～265 aa的新线性表位，并揭示了N蛋白的核质穿梭规律，为TGEV感染的诊断及N蛋白研究提供工具。

关键词

猪传染性胃肠炎病毒 / 核衣壳蛋白 / 单克隆抗体 / 抗原表位 / 亚细胞定位