中国麻鸭血管紧张素转化酶2(ACE2)原核表达及多克隆抗体的制备与鉴定

摘要

旨在阐明鸭血管紧张素转化酶2(ACE2)的组织分布特征，并建立相应的蛋白与抗体研究工具。以中国麻鸭为研究对象，利用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法扩增鸭ACE2基因，克隆至pET32a载体，并转化入大肠杆菌中诱导表达，筛选异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导ACE2重组蛋白表达及纯化的最适条件，以纯化的鸭ACE2重组蛋白为抗原免疫小鼠，制备鼠抗鸭ACE2多克隆抗体。间接酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定抗体效价，并验证其特异性等；免疫荧光和蛋白质免疫印迹法(Western blot)明确ACE2在鸭体内的分布和细胞学定位。结果：成功构建了pET32a-ACE2原核表达载体，获得鸭ACE2重组蛋白，优化IPTG诱导表达的最适条件为：2 mmol/L,诱导12 h; KCl染色切胶法纯化。进一步证实该鸭ACE2重组蛋白为单链蛋白，分子量约为110 kDa,等电点(pI)值为5.61,主要以包涵体形式存在。同时，制备了鼠抗鸭ACE2多克隆抗体，抗体效价为1∶12 800,证实ACE2在鸭多组织内广泛存在，主要于细胞膜上表达。综上，该研究为进一步探索鸭ACE2的功能提供了试验依据和检测工具。

关键词

中国麻鸭 / 血管紧张素转化酶2 / 原核表达 / 重组蛋白 / 多克隆抗体