牛冠状病毒单克隆抗体制备及亚型鉴定

范昊宇; 蒋蔚; 汪萍; 宫震; 韩翔舒; 白航飞; 刘姝悦; 李月; 张立雪; 付修龙; 杜玮; 阿依江·木合塔尔; 平继辉; 朱启运; 蒋松; 夏俊

畜牧与兽医 ›› 2025, Vol. 57 ›› Issue (12) : 116 -123.

牛冠状病毒单克隆抗体制备及亚型鉴定

范昊宇, 蒋蔚, 汪萍, 宫震, 韩翔舒, 白航飞, 刘姝悦, 李月, 张立雪, 付修龙, 杜玮, 阿依江·木合塔尔, 平继辉, 朱启运, 蒋松, 夏俊

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摘要

旨在制备牛冠状病毒(Bovine coronavirus,BCoV)单克隆抗体(MAb),为BCoV疫苗制备和建立免疫胶体金等特异性检测方法奠定基础。使用原核表达系统制备重组BCoV N蛋白，BCoV灭活全病毒液免疫BALB/c小鼠；以N蛋白和全病毒为抗原，通过间接ELISA法检测抗体效价。经细胞融合与5轮亚克隆，筛选出分泌目标抗体的单克隆细胞株。采用腹水法制备单克隆抗体并纯化，通过间接免疫荧光试验(IFA)和Western blot验证抗体反应性与特异性。结果：筛选出3株针对BCoV N蛋白的杂交瘤细胞株(2D12C、3D6E、4D1F),分泌的单克隆抗体轻链均为Kappa链，2D12C与4D1F重链为IgG2a亚型，3D6E重链为IgG1亚型；IFA试验表明3株单克隆抗体均能与BCoV发生特异性结合；Western blot证明3株单克隆抗体与BCoV和重组表达BCoV N蛋白均反应良好，且3株单克隆抗体与感染牛轮状病毒、牛传染性鼻气管炎病毒、牛病毒性腹泻病毒及牛副流感病毒3型的细胞均不发生特异性反应。综上，制备了3株特异性较高、生物学活性良好的BCoV单克隆抗体，为后续疫苗制备及检测方法研究奠定了基础。