牛冠状病毒单克隆抗体制备及亚型鉴定

摘要

旨在制备牛冠状病毒(Bovine coronavirus,BCoV)单克隆抗体(MAb),为BCoV疫苗制备和建立免疫胶体金等特异性检测方法奠定基础。使用原核表达系统制备重组BCoV N蛋白，BCoV灭活全病毒液免疫BALB/c小鼠；以N蛋白和全病毒为抗原，通过间接ELISA法检测抗体效价。经细胞融合与5轮亚克隆，筛选出分泌目标抗体的单克隆细胞株。采用腹水法制备单克隆抗体并纯化，通过间接免疫荧光试验(IFA)和Western blot验证抗体反应性与特异性。结果：筛选出3株针对BCoV N蛋白的杂交瘤细胞株(2D12C、3D6E、4D1F),分泌的单克隆抗体轻链均为Kappa链，2D12C与4D1F重链为IgG2a亚型，3D6E重链为IgG1亚型；IFA试验表明3株单克隆抗体均能与BCoV发生特异性结合；Western blot证明3株单克隆抗体与BCoV和重组表达BCoV N蛋白均反应良好，且3株单克隆抗体与感染牛轮状病毒、牛传染性鼻气管炎病毒、牛病毒性腹泻病毒及牛副流感病毒3型的细胞均不发生特异性反应。综上，制备了3株特异性较高、生物学活性良好的BCoV单克隆抗体，为后续疫苗制备及检测方法研究奠定了基础。

关键词

牛冠状病毒 / N蛋白 / 单克隆抗体 / 间接ELSIA

基金资助

新疆维吾尔自治区重大科技专项(2023A02007); 新疆维吾尔自治区天山英才青年科技拔尖人才项目(2022TSYCCX0046); 新疆维吾尔自治区肉牛产业技术体系项目资助项目(XJARS-10); 自治区西门塔尔(安格斯)牛群体改良体系经费资助项目(2025XM-14)