基于CRISPR/Cas12a与重组酶扩增的非洲猪瘟病毒可视化检测技术

摘要

旨在建立一种快速、灵敏且特异性强的即时诊断(point-of-care testing, POCT)非洲猪瘟病毒(ASFV)的检测方法，以满足现场快速诊断和监控的需求。本研究以ASFV的CD2v基因为靶点，采用酶促重组酶扩增技术(ERA)实现核酸的恒温快速扩增，并结合CRISPR/Cas12a系统对扩增产物进行特异性识别，同时结合荧光报告分子，构建了一种可视化快速检测体系。通过优化反应条件，验证了该体系的灵敏度、特异性和稳定性。结果：该检测体系在37℃恒温条件下，30 min内即可完成检测，灵敏度可达10 copies/μL病毒DNA。特异性检测结果显示，该体系未与伪狂犬病毒(PRV)等常见猪病病毒发生交叉反应，且阳性样品可通过肉眼直观识别。此外，该方法无需精密仪器和复杂操作，检测周期显著短于传统方法。综上，本研究建立的ASFV可视化快速检测体系具有快速、灵敏、特异性强和操作简便等特点，在实验室条件下表现出良好性能，为其在现场条件下的早期诊断和监测应用提供了技术储备和研究基础。

关键词

非洲猪瘟病毒 / 即时诊断 / 酶促重组酶扩增技术 / CRISPR/Cas12a / 侧向流试验

基金资助

江苏省重点研发计划(现代农业)重点资助项目(BE2020407); 泰州市科技支撑计划(农业)资助项目(TN202001)