羊口疮病毒口唇和内脏感染株ORFV123基因生物信息学特征与宿主转录响应的比较

摘要

旨在探究羊口疮病毒(ORFV)口唇和内脏感染株的ORFV123基因编码蛋白分子特征及其对宿主细胞作用的差异。采用PCR技术扩增ORFV123基因，克隆至p MD-19T进行测序，采用生物信息学方法分析其基因特征;同时构建真核表达载体p EGFP-N1-123K、p EGFP-N1-123N，将真核表达载体转染至原代山羊口腔上皮细胞，分别采用Western blot和实时荧光定量PCR(RT-qPCR)验证融合蛋白在细胞内的表达水平;运用转录组测序技术分析基因表达谱变化。结果:口唇及内脏感染株的ORFV123基因全长均为1 551 bp，编码516个氨基酸，虽进化分支不同，但具有相似的理化特性和蛋白结构特征，三维结构分析揭示，2个感染株ORFV123蛋白在C末端环区存在构象差异; Western blot结果显示2株病毒ORFV123基因在羊口腔上皮细胞中均能成功表达。转录组分析显示ORFV口唇与内脏感染株间有16个差异表达基因(DEGs),7个上调，9个下调，2个毒株与空细胞组比较共鉴定出1 208个DEGs(口唇株806个，内脏株402个)，且主要富集于蛋白质消化吸收通路、磷脂酰肌醇3激酶-蛋白激酶B(PI3K-Akt)信号通路与晚期糖基化终末产物-其受体(AGE-RAGE)通路。本文为深入了解ORFV123蛋白的功能及其在病毒致病机制中的作用提供了基础数据。

关键词

羊口疮 / 锚蛋白 / ORFV123基因 / 口腔上皮细胞 / 转录组测序

基金资助

云南省兽医公共卫生国际联合研发中心项目(202403AP140033); 2024年云南省国际科技特派员(个人)认定工作项目(202403AK140039); 云财教(2025)12号施甸县农民院士科技服务站-富国文项目(A3012025013)