猫疱疹病毒Ⅰ型SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法的建立及应用

摘要

猫疱疹病毒Ⅰ型(FHV-1)是威胁猫科动物健康的重要传染性疾病，本研究旨在研发一种灵敏、高效的FHV-1检测技术。依据Gen Bank上FHV-1 US6保守区域的基因序列，设计合成1对针对FHV-1 g D基因的引物，建立了一种SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR的检测方法，构建标准曲线后分别验证该方法的特异性、敏感性、重复性，并将其进一步应用于人工感染猫产生的临床样本检测。结果:该特异性引物与猫杯状病毒(FCV)、猫细小病毒(FPV)和猫冠状病毒(FCoV)均未出现交叉反应，检测下限为14.78 copies/μL，组内和组间重复试验的变异系数均低于2%;该方法对临床样本的检出率比常规PCR高出25.46%;通过该方法检测人工感染FHV-1强毒后猫的每日排毒量，结果呈现上升趋势，与临床发病程度相符，猫的脏器病毒载量存在个体差异，但集中在心脏、肺脏、肠道和膀胱中检出。综上，该研究建立的SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR方法对FHV-1具有较好的特异性、灵敏度和重复性，为FHV-1感染的快速诊断以及疾病的防控提供方法支持。

关键词

猫疱疹病毒Ⅰ型 / 荧光定量PCR / SYBR GreenⅠ / US6基因 / 猫病毒性鼻气管炎