猪传染性胃肠炎病毒羊驼重链抗体的制备及验证

摘要

旨在制备针对猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)的重链抗体(Hc Ab)，为制备TGEV特异性纳米抗体(Nb)奠定基础。将TGEV感染ST细胞，扩繁TGEV粒子，使用蔗糖密度梯度离心法纯化TGEV抗原，将纯化的TGEV抗原与ISA206佐剂1∶1混合乳化后，免疫1只8周龄雌性羊驼，制备抗TGEV的羊驼Hc Ab，利用ELISA、Western blot、间接免疫荧光试验(IFA)验证制备的Hc Ab。ELISA结果显示，随着免疫次数的增加，针对TGEV的Hc Ab水平呈上升趋势，当抗血清稀释至1∶6 400时仍具有反应性; Western blot结果显示，制备的Hc Ab能特异性地和TGEV S1蛋白及N蛋白反应;为进一步验证Hc Ab的反应性，将TGEV感染ST细胞并制备蛋白和细胞样品，Western blot检测结果显示本研究制备的Hc Ab能与TGEV编码的4种结构蛋白(S/E/M/N)特异性结合，IFA结果显示制备的Hc Ab可与TGEV发生特异性结合反应。综上，本研究成功制备了抗TGEV的Hc Ab，为后续研究奠定基础。

关键词

猪传染性胃肠炎病毒 / 结构蛋白 / 羊驼 / 重链抗体