猪繁殖与呼吸综合征病毒多表位融合蛋白间接ELISA抗体检测方法的建立及应用

摘要

旨在建立猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)多表位融合蛋白(MEFP)间接ELISA抗体检测方法并验证其应用效果。利用融合表达的PRRSV囊膜蛋白MEFP作为包被抗原，通过优化抗原包被浓度、血清稀释度和二抗稀释度等条件，建立检测PRRSV抗体的间接ELISA方法(MEFP-ELISA)。结果:该方法最佳抗原包被浓度为200 ng/孔，最佳血清稀释度为1∶100，最佳酶标二抗稀释度为1∶500;具有较高的特异性，与猪圆环病毒2型(PCV2)、猪瘟病毒(CSFV)、伪狂犬病病毒(PRV)等病原抗体无交叉反应;批内和批间变异系数均低于10%，表现出良好的重复性;用该方法与商品化PRRSV囊膜蛋白抗体ELISA试剂盒同时检测447份临床血清，结果显示，总符合率达92.39%,Kappa系数为0.821 9;针对疫苗免疫猪的抗体动态监测结果表明，2种方法的抗体变化趋势较为一致;利用该方法检测湖南省13个核心种猪场的650份临床血清，其抗体总阳性率为34.62%，结合PRRSV N蛋白抗体ELISA试剂盒检测结果，综合分析了猪群的PRRSV感染及免疫状况。综上，本研究建立的MEFP-ELISA方法适用于PRRSV血清学检测，具有良好的临床应用前景。

关键词

猪繁殖与呼吸综合征病毒 / 多表位融合蛋白 / 抗体 / 血清学检测