鸽腺病毒Ⅰ型结构蛋白重组表达及多克隆抗体制备

王晶毅; 刘金金; 李永强; 孙莹; 赵天; 方玉鹏; 张晓晴; 高静怡; 高孟瑶; 潘素敏; 刘永波; 付志新; 张杰; 刘永生; 杨顺利

畜牧与兽医 ›› 2026, Vol. 58 ›› Issue (2) : 119 -124.

王晶毅, 刘金金, 李永强, 孙莹, 赵天, 方玉鹏, 张晓晴, 高静怡, 高孟瑶, 潘素敏, 刘永波, 付志新, 张杰, 刘永生, 杨顺利

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摘要

为制备鸽腺病毒Ⅰ型(PiAdV-1)六邻体蛋白(Hexon)和纤突蛋白(Fiber)-2的多克隆抗体，用蛋白结构分析软件对Hexon基因和Fiber-2基因序列进行分析，设计其相关抗原片段，克隆至载体pET-28a(+)中，获得重组质粒p ET-28a-Hexon和pET-28a-Fiber2。利用大肠杆菌BL-21(DE3),IPTG诱导表达，并通过Ni亲和层析树脂纯化。然后，用纯化的重组蛋白免疫新西兰大白兔，制备多克隆抗体并利用Protein A层析柱纯化。SDS-PAGE结果分别出现大小约27和54 k Da的目的条带，表明重组Hexon和Fiber蛋白成功表达。ELISA方法检测免疫后兔血清，抗Hexon和Fiber-2多抗血清效价均高达1∶10～8。Western blot检测表明制备的多克隆抗体具有目标蛋白的结合活性。本研究为建立PiAdV-1的检测方法奠定基础，也为PiAdV-1亚单位疫苗研制提供支持。