日本脑炎病毒E蛋白单克隆抗体的制备及其抗原表位的鉴定

摘要

旨在制备靶向日本脑炎病毒（JEV）包膜蛋白结构域Ⅲ（EDⅢ）的特异性单克隆抗体（m Ab）并鉴定其抗原表位。通过原核表达成功制备EDⅢ重组蛋白，经纯化后免疫BALB/c雌鼠。运用杂交瘤细胞技术成功制备出4株可稳定分泌抗EDⅢ蛋白抗体的杂交瘤细胞3B8、4H1、6C5和6E9，其腹水效价依次为1∶409 600、1∶1 638 400、1∶204 800和1∶1 638 400。亚型鉴定结果表明:4株m Abs重链均属于Ig G2b亚类，轻链为Kappa型。特异性鉴定结果显示:4株m Abs均能识别JEV EDⅢ蛋白及病毒感染的细胞，与鸭坦布苏病毒（DTMUV）无交叉反应，但均未表现出中和活性。表位鉴定结果显示:m Ab 3B8和6C5抗原识别区域位于⁶²RLVTVNPFVATSS⁷⁴,m Ab 4H1和6E9抗原识别区域位于⁷⁵SNSKVLVEMEPP⁸⁶。结合生物信息学分析证实，抗原表位在JEV不同基因型间高度保守且位于蛋白表面。本研究成功获得4株针对JEV EDⅢ蛋白的单克隆抗体并鉴定了其识别的线性表位，为快速检测JEV感染和探究E蛋白的结构与功能奠定基础。

关键词

日本脑炎病毒 / EDⅢ蛋白 / 单克隆抗体 / B细胞表位

基金资助

国家重点研发计划项目(2022YFD1800102); 国家自然科学基金面上项目(32273040)