燕山绒山羊子宫内膜上皮细胞的分离培养和鉴定

摘要

旨在分离培养燕山绒山羊子宫内膜上皮细胞（goat endometrial epithelial cells, GEECs）,为探究胚胎附植过程的调控机制提供材料。采集燕山绒山羊子宫组织并剪取子宫角，使用胰酶加组织块法分离GEECs,并进行原代培养。通过免疫荧光法（IF）检测上皮细胞标志物细胞角蛋白18 （CK18）的表达情况；同时，添加激素雌二醇（E₂）、孕酮（P₄）以及干扰素τ（IFN-τ）模拟胚胎附植时期子宫内激素环境，利用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测胚胎附植和细胞周期相关基因的表达。结果：分离培养的细胞均匀贴于培养皿底部并呈现经典的铺路石状，且IF结果阳性率在90%以上。外源添加激素后，E₂和P₄以及二者联合处理的细胞中干扰素刺激基因15（ISG15）和S-腺苷甲硫氨酸基区域蛋白2（RSAD2）表达显著下调（P<0.05）,而E₂+P₄+IFN-τ联合处理后的2个基因表达显著上调（P<0.05）;分泌型磷蛋白1（SPP1）的各激素处理组均显著抑制其表达（P<0.05）;单独使用E₂或P₄处理均使同源框蛋白10（HOXA10）表达显著上调（P<0.05）,然而这一上调被IFN-τ处理抑制；细胞周期蛋白A2（CCNA2）和细胞周期蛋白B1（CCNB1）在E₂的作用下表达显著上调（P<0.05）,而IFN-τ却能抑制这一上调；细胞周期蛋白D1（CCND1）的各激素处理组均显著抑制其表达（P<0.05）,说明细胞可能停留在增殖但未完全分化阶段。综上，本研究高效分离出原代燕山绒山羊GEECs,且细胞在激素处理后表现出较为理想的理化特性，IFN-τ与性激素协同调控胚胎附植关键基因，E₂可能通过激活细胞周期进程为胚胎附植提供微环境支持，这为进一步揭示激素在胚胎附植过程中的生理作用奠定基础。

关键词

燕山绒山羊 / 子宫内膜上皮细胞 / 胚胎附植 / 激素