猪腺病毒3型免疫过氧化物酶单层细胞染色检测方法的建立及初步应用

摘要

旨在建立一种猪腺病毒3型(PADV-3)抗体检测方法并开展临床血清抗体的调查与分析。利用PCR扩增PADV-3的Hexon和Protease基因，构建重组真核表达载体pEGFP-PADV-3-Hexon和pEGFP-PADV-3-Protease,采用双酶切及测序鉴定；将真核表达载体pEGFP-PADV-3-Hexon和pEGFP-PADV-3-Protease分别转染HEK293细胞，激光共聚焦显微镜观察蛋白亚细胞定位，通过G418筛选，建立稳定表达Hexon或Protease重组蛋白的2种细胞系，以其作为包被抗原，建立免疫过氧化物酶单层细胞染色法(IPMA)对采自山东、山西、四川、黑龙江等地猪场的血清样品进行PADV-3 Hexon和Protease特异性抗体检测。结果：PADV-3 Hexon基因和PADV-3 Protease基因的读码框(ORF)分别为2 775 bp和615 bp,重组蛋白Hexon定位在细胞质中，Protease在胞质和胞核中均匀分布，G418筛选得到了稳定表达Hexon或Protease重组蛋白的2个细胞系。IPMA检测显示，来自12个猪场的446份血清样品中，Hexon抗体阳性率为39.69%,Protease抗体阳性率为34.75%;Hexon和Protease双抗体阳性率为32.29%;PADV-3抗体阳性样品合计188份，总阳性率为42.15%;哺乳仔猪、保育猪、育成猪、母猪和种公猪抗体阳性率依次为50.00%、36.64%、86.84%、47.37%和87.50%。综上，本研究成功建立了PADV-3抗体的IPMA检测方法，并证实PADV-3感染较为普遍，为进一步开展该病毒感染的防治提供了流行病学基础数据。

关键词

猪腺病毒3型 / Protease基因 / Hexon基因 / 血清抗体 / 免疫过氧化物酶单层细胞染色法