PRRSV多表位核酸疫苗的制备及免疫原性评价

摘要

猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)对全球养猪业危害严重，现有疫苗存在免疫效果或安全性不足的缺陷。为提高核酸疫苗的免疫原性，本研究基于PRRSV结构蛋白(GP3、GP4、GP5)和非结构蛋白(NSP2、NSP7、NSP12)的8个B细胞表位，通过柔性连接肽串联，并在N端引入树突状细胞肽(DCpep)、通用T细胞表位PADRE及肠微褶皱细胞肽(Mpep)，构建多表位抗原NGP。进一步将铁蛋白(Ft)与NGP融合，构建真核表达质粒pc DNA3.1-NGP-Ft，以评估Ft对DNA疫苗的免疫增强作用。试验前期通过原核表达系统制备重组蛋白MBP-NGP，并免疫小鼠验证其免疫原性。Western blot和间接免疫荧光(IFA)证实NGP及NGP-Ft在细胞中成功表达。小鼠免疫结果显示，pc DNA3.1-NGP-Ft组相较于pcDNA3.1-NGP组，ELISA抗体效价、中和抗体水平、脾淋巴细胞增殖能力及γ干扰素(IFN-γ)分泌量均增强(P<0.05)。淋巴结生发中心分析表明，Ft融合抗原可延长淋巴结内抗原滞留，促进免疫应答。本研究首次证实Ft可有效提升PRRSV多表位DNA疫苗的体液与细胞免疫水平，为新型纳米颗粒疫苗的研发提供了理论依据。

关键词

PRRSV / 铁蛋白 / 多表位疫苗 / 核酸疫苗 / 免疫原性 / 中和抗体