猪链球菌血清7、8、9型三重荧光PCR检测方法的建立与应用

摘要

旨在建立一种可同时检测猪链球菌血清7、8、9型的三重荧光PCR方法，为实现猪链球菌临床样本灵敏、准确、快速分型提供技术支撑。基于猪链球菌多糖聚合酶基因(wzy)建立了一套三重荧光PCR检测方法，通过标准曲线、特异性与敏感性试验对其进行评价，并应用本方法检测临床样本，同时与普通PCR结果进行比较。结果:建立的三重荧光PCR检测方法可准确扩增目标血清型，与其他常见血清型及其他常见细菌无交叉反应;标准品质粒拷贝数的最低检测限为1×10～2copies/μL，敏感性较普通PCR高10～2～10～4倍;对123份临床猪链球菌阳性样本进行检测，发现其对血清7、8和9型的检出率分别为42.3%(52/123)、25.2%(31/123)和31.7%(39/123)，高于普通PCR方法的22.0%(27/123)、9.8%(12/123)和13.8%(17/123);扁桃体样本存在多种目标血清型共检出现象，其中9.8%(12/123)的样本同时检出3种目标血清型，22.8%(28/123)同时检出2种，24.4%(30/123)仅检出1种，另有43.1%(53/123)未检出目标血清型。综上，本研究成功建立了猪链球菌血清7、8、9型的三重荧光PCR检测方法，具有良好的特异性、敏感性和重复性，适用于临床样本的快速分型鉴定，为猪链球菌的流行病学监测与综合防控提供了技术支持。

关键词

猪链球菌 / 血清7型 / 血清8型 / 血清9型 / 荧光PCR