猪繁殖与呼吸综合征病毒谱系8毒株N蛋白单克隆抗体的制备及其鉴定

摘要

猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）是由猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）引起的一种猪的全身性感染疫病，严重危害全球养猪业。为获得一株适用于各种检测方法的单克隆抗体，本研究以高致病性毒株BB0907的核衣壳（N）蛋白作为抗原，经原核表达和亲和层析纯化后免疫BALB/c小鼠，取免疫小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合，通过间接ELISA筛选阳性杂交瘤细胞，并结合有限稀释法进行亚克隆，获得能稳定分泌特异性抗体的单克隆杂交瘤细胞株;采用Western blot、间接免疫荧光、流式细胞术及免疫组织化学等方法鉴定单抗的反应特性，利用抗体亚型鉴定试剂盒确定重链和轻链类型，并通过肽扫描技术识别其抗原表位。结果:共获得了3株能特异性识别PRRSV N蛋白的单克隆抗体，抗体重链均为Ig G2b亚类，轻链均为Kappa型，识别的抗原表位均为⁵⁶PLATEDDVRH⁶⁵，且在不同毒株间的保守性较高，经验证适用于类NAD30和经典毒株的检测。本研究为深入探讨PRRSV的N蛋白生物学功能及其临床检测技术提供参考。

关键词

猪繁殖与呼吸综合征病毒 / 单克隆抗体 / N蛋白 / 抗原表位