猪德尔塔冠状病毒NSP10蛋白原核表达及其多克隆抗体制备

葛常起; 李建娥; 侯志铮; 郭倩汝; 韩俊成; 何晓东; 李建龙; 弓超

畜牧与兽医 ›› 2026, Vol. 58 ›› Issue (6) : 83 -88.

葛常起, 李建娥, 侯志铮, 郭倩汝, 韩俊成, 何晓东, 李建龙, 弓超

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摘要

旨在制备猪德尔塔冠状病毒(PDCoV) NSP10蛋白多克隆抗体并进行验证。首先将PDCoV Bv23毒株的RNA作为模版，通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增NSP10基因，插入原核表达载体构建重组质粒，转化至大肠杆菌感受态细胞中，诱导表达纯化;然后将纯化后的蛋白与弗氏完全佐剂混合后免疫小鼠，免疫3次后，收集血清;最后利用间接酶联免疫吸附试验、免疫印迹与间接免疫荧光的方法验证并评价多克隆抗体的效价与反应性。结果:原核表达的PDCoV NSP10蛋白在包涵体中，分子量为19～20 kDa;小鼠多克隆抗体滴度为1∶8 192;该抗体能够与NSP10蛋白条带发生特异性结合，且与PDCoV具有良好的反应性。综上，本研究成功制备了PDCoV NSP10蛋白的多克隆抗体，为深入研究其生物学功能奠定物质基础。