5种猪呼吸道病毒恒温隔绝式热对流PCR检测方法的建立及应用

摘要

旨在开发一种新型检测技术，用于临床实践中5种常见猪呼吸道病毒的快速鉴别诊断。分别将猪瘟病毒(CSFV)的5'UTR基因、猪流感病毒(SIV)的M2基因、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的ORF6基因、猪圆环病毒2型(PCV2)的ORF1基因以及伪狂犬病病毒(PRV)的g E(US8)基因作为靶基因，建立了恒温隔绝式热对流PCR(ii PCR)检测方法，并通过琼脂糖凝胶电泳评估其特异性，测定该法对5种病毒的检测下限，评价其批内、批间重复性及稳定性;同时以荧光定量PCR为对照，对92份猪肺脏临床样品进行检测并比较2种方法的符合率，进而分析各病毒单一及混合感染率。结果:ii PCR特异性强，其对CSFV、SIV、PRRSV、PCV2的检测下限均为10～1copies/μL，对PRV为10～2copies/μL，且重复性和稳定性良好;荧光定量PCR对CSFV、PCV2、PRV的检测下限分别为10～2、10～1、10～2copies/μL，对SIV和PRRSV为10～1copies/μL; 2种方法对92份临床样品的检测符合率达100%;临床样品中CSFV、SIV、PRRSV、PCV2、PRV的阳性感染率分别为5.43%、0、44.57%、10.87%、3.26%,CSFV与PCV2、PRRSV与PCV2、PRRSV与PRV以及PRRSV、PCV2与CSFV的混合感染率分别为1.09%、5.43%、3.26%和1.09%。ii PCR方法的建立为猪呼吸道症候群5种主要病毒的快速、精准诊断提供了有效技术手段。

关键词

猪瘟病毒 / 猪流感病毒 / 猪繁殖与呼吸综合征病毒 / 猪圆环病毒2型 / 猪伪狂犬病病毒 / 恒温隔绝式热对流PCR