基于猪A型塞内卡病毒VP2蛋白的间接ELISA抗体检测方法的建立与应用

摘要

为建立一种可用于临床诊断A型塞内卡病毒(SVA)感染的方法，本研究通过原核表达VP2蛋白并建立间接ELISA方法。结果显示，pET-28a-VP2蛋白以包涵体形式表达，且能与SVA抗体发生特异性反应;以VP2蛋白为包被原建立ELISA检测方法:最佳抗原包被量为500 ng/孔; 2.5%牛血清白蛋白(BSA)作为封闭液4℃封闭24 h;最佳血清稀释比例为1∶100;最佳酶标二抗稀释比例为1∶40 000;最佳显色时间为15 min。该方法与临床中猪常见病原阳性血清如口蹄疫病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、伪狂犬病病毒、猪圆环病毒、猪轮状病毒、猪瘟病毒均不发生交叉反应，敏感性达到了1∶800，板内与批间变异系数均小于10%。利用建立的方法对2024年13个省份血清样品进行检测，其中猪群抗体阳性率为23%，猪场抗体阳性率为65%; SVA感染呈现季节性，表现为冬春加剧、夏秋平息。

关键词

A型塞内卡病毒 / 间接ELISA / 原核表达 / VP2