猪捷申病毒基因4型云南流行株的分离与鉴定

摘要

旨在建立一种高效准确的猪捷申病毒（porcine Teschovirus,PTV）实时荧光定量PCR检测方法，并对云南流行毒株进行分离、鉴定。通过比对GenBank近年收录PTV全基因组，在5'-UTR非编码区保守区域设计引物，设置简并碱基，建立了SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法;将PTV-4阳性样品接种于猪肾细胞（PK-15）进行病毒的分离及其生物学特性测定。结果:所建立荧光定量PCR方法的标准曲线呈现良好的线性关系，相关系数R²=0.993 4，最低检测限为8.35×10～4copies/μL，批内变异系数与批间变异系数均小于3%，且与其他病原无交叉反应，具有良好的特异性。PTV-4阳性样品接种PK-15细胞，24 h后开始出现细胞病变，其主要表现为细胞皱缩、颗粒化、聚集性贴壁，72 h后细胞出现脱落;传至第11代时，病毒载量从8.78×10～4copies/μL升至8.16×10～7copies/μL，具有稳定增殖能力。透射电镜观察到病毒粒子呈球形、无囊膜，直径26～30 nm。综上，本研究建立了一种可应用于诊断和流行病学调查的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法，获得的PTV云南流行株则为其结构功能、致病机制及免疫预防等后续研究奠定了基础。

关键词

猪捷申病毒 / 荧光定量PCR / 病毒分离 / 电镜观察