非洲猪瘟病毒p49蛋白间接ELISA抗体检测方法的建立

摘要

旨在建立可以检测非洲猪瘟病毒(ASFV)结构蛋白p49抗体的血清学检测方法。通过构建p Cold I-p49重组质粒，以纯化的p49蛋白为包被抗原，优化各项反应条件，建立间接酶联免疫吸附试验(ELISA)抗体检测方法，验证方法的特异性、灵敏性、重复性，并对临床血清样品进行检测。结果:获得的重组p49蛋白可以与His标签抗体和ASFV标准阳性血清发生反应，ELISA方法的抗原包被浓度为0.8μg/m L，封闭液为5%脱脂乳，待检血清以1∶400稀释，37℃孵育0.5 h;二抗工作浓度为1∶20 000,37℃孵育1 h，四甲基联苯胺(TMB)显色15 min;该方法的阳性临界值为0.189(≥0.189为阳性，<0.189为阴性)，且具有良好的特异性、灵敏性、可重复性，最低检测稀释度为1∶3 200，批内变异系数在1.53%～5.91%之间，批间变异系数在3.46%～5.73%之间，与商品化试剂盒符合率为92.39%(85/92)。本研究成功建立ASFV p49蛋白间接ELISA抗体检测方法，为非洲猪瘟诊断方法开发提供重要支持。

关键词

非洲猪瘟病毒 / p49蛋白 / 原核表达 / 间接ELISA

基金资助

中国博士后科学基金面上项目(2024M761449); 国家生猪产业技术体系专项(CARS-35)