干扰角蛋白17基因对燕山绒山羊黑色素细胞黑色素生成相关基因的影响

摘要

旨在通过建立燕山绒山羊皮肤黑色素细胞的原代培养，探究角蛋白17(KRT17)在该细胞中的表达及其对黑色素生成关键基因表达的调控作用。采用二次酶解法(Dispase Ⅱ+胰蛋白酶)和细胞筛分离培养燕山绒山羊耳缘皮肤黑色素细胞，通过多巴染色、Masson-Fontana黑色素染色和前黑素体蛋白(gp100)免疫组化进行鉴定; KRT17基因的干扰片段转染至黑色素细胞后，通过实时荧光定量PCR(RT-q PCR)和Western blot验证干扰效率，检测小眼畸形相关转录因子(MITF)、酪氨酸酶(TYR)、酪氨酸酶相关蛋白1(TYRP1)和多巴色素异构酶(DCT)的mRNA相对表达水平和黑色素含量。结果:成功获得了形态典型，多巴染色阳性，Masson-Fontana黑色素染色阳性且gp100表达阳性(纯度>90%)的原代燕山绒山羊黑色素细胞;干扰结果显示，与对照组相比，沉默KRT17组黑色素含量显著升高(P<0.05)，显著上调了MITF、TYR、TYRP1和DCT的mRNA表达水平(P<0.05)。本研究成功建立了燕山绒山羊黑色素细胞的体外培养体系，证实KRT17在该细胞中稳定表达，且通过负向调控MITF及其下游靶基因的转录水平，参与调控燕山绒山羊黑色素的生成过程。

关键词

燕山绒山羊 / 黑色素细胞 / 角蛋白17 / 黑色素生成

基金资助

河北省高等学校科学研究项目青年基金项目(QN2026802); 河北省自然科学基金青年科学基金项目(C2025407073)